MANUEL D’AIDE A LA FORMATION EN TRANSFUSION SANGUINE

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MANUEL D’AIDE A LA FORMATION

EN TRANSFUSION SANGUINE

Coordination Régionale d’Hémovigilance
Docteur Mahdi TAZEROUT – Madame Yolande GALINIER
Direction Régionale des Affaires Sanitaires et Sociales Midi-Pyrénées
10 Chemin du Raisin – 31050 TOULOUSE Cedex 9
Tél. 05.34.30.24.38 – Fax : 05.34.30.24.39

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CHAPITRE 1 : LE DON DU SANG

La transfusion sanguine est une discipline aux confins de l’hématologie et de l’immunologie : elle implique la
médecine, la biologie, la bio-industrie et la sociologie ; elle repose sur l’éthique.

La transfusion sanguine consiste à administrer le sang ou l’un de ses composants (globules rouges,
plaquettes, granulocytes, plasma, protéines) provenant d’un ou plusieurs sujets appelés « donneurs », à un
ou plusieurs sujets malades appelés « receveurs ».

L’élaboration de produits cellulaires dits labiles, nécessaires au traitement des malades, n’est possible que
par la mise en œuvre d’une chaîne de solidarité dont le premier maillon est constitué par les donneurs de
sang bénévoles.

La mise à disposition des produits doit obligatoirement répondre à des règles de bonnes pratiques
transfusionnelles : prélèvement, préparation, qualification biologique, distribution et indications cliniques. Le
respect de ces règles est une nécessité absolue.

L’Etablissement Français du Sang prépare des produits sanguins labiles de qualité répondant à des normes
précises et participe à l’approvisionnement en plasma au Laboratoire Français du Fractionnement et des
Biotechnologies (LFB) pour la production de produits stables.

Le plasma permet la préparation d’albumine, de facteurs de coagulation et d’immunoglobulines.

I. LE PRELEVEMENT ET LA QUALIFICATION DU DON

Selon la législation française, toute personne en bonne santé, âgée de 18 à 65 ans, peut donner son sang.

Le volume maximal prélevé lors du don est de 8ml/kg.

Cependant, quel que soit le poids de la personne, un volume total de 500 ml ne doit pas être dépassé, le
nombre total par année ne doit pas excéder 5 pour les hommes et 3 pour les femmes pour les dons
cellulaires et l’intervalle doit être au moins égal à 8 semaines.

Toutefois, entre 60 et 65 ans, le nombre total par année chez les hommes et les femmes ne peut être
supérieur à 3 dons.

La compensation des pertes subies lors d’un don de sang total s’effectue normalement en quelques
semaines.

II. LES CONTROLES

A l’occasion de chaque don, le donneur fait l’objet :

(cid:252) d’un contrôle clinique :

§ Entretien médical (un document de préparation à l’entretien médicale préalable au don du sang) est

remis au donneur de sang, lors de l’enregistrement

§ Examen général.

Il permet d’éliminer certaines contre-indications au don.

Cette étape est définie comme « l’ensemble des mesures visant à réduire ou à éliminer les risques
immunologiques ou infectieux liés à la transfusion de produits sanguins » (circulaire DH/DGS/3B/4 du 15
janvier 1992).

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(cid:252) de contrôles biologiques obligatoires :
§ NFS
§ dépistage syphilis
§ détection de l’Ag HBs, anticorps anti-HBc
§ dépistage des anticorps anti VIH1/VIH2
§ dépistage des anticorps anti VHC
§ diagnostic génomique viral : VIH/VHC
§ dépistage des anticorps anti-HTLV1/HTLV2
§ groupe sanguin et phénotype rhésus Kell
§ dépistage des hémolysines Anti-A et Anti-B
§
recherche des anticorps anti-érythrocytaires (RAE)
§ dépistage du CMV (cytomégalovirus) non obligatoire.

Et en cas de voyage en zone d’endémie du Paludisme : sérologie anti-paludéenne.

III. LES PRODUITS SANGUINS LABILES

Les produits sanguins labiles (PSL), issus du sang de donneurs, ne subissent aucune transformation. Toutes les
étapes de préparation des PSL visent à accroître leur pureté et leur sécurité.

Les prélèvements et la préparation des PSL sont régis par des textes législatifs contraignants. Seul
l’Etablissement Français du Sang est autorisé à les réaliser.

IV. LA COMPOSITION DU SANG

Le sang se compose de cellules et de plasma.

(cid:216) Le plasma contient des protéines diverses, dont :

§
§
§

les immunoglobulines,
l’albumine,
les facteurs de coagulation.

(cid:216) Les cellules du sang se divisent en trois catégories :

§

les globules rouges qui transportent l’oxygène des poumons
aux tissus et captent le gaz carbonique qui est éliminé
ensuite par les voies respiratoires ;

§

les globules blancs qui défendent l’organisme contre les
agressions des microbes, bactéries et virus ;

§

les plaquettes qui empêchent le saignement en colmatant
les lésions des vaisseaux.

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V. LE DON DE SANG TOTAL

C’est la forme de prélèvement la plus connue. Elle consiste à prélever 450 ml à 500 ml de sang directement
de la veine du donneur jusqu’à une poche de recueil qui contient l’anticoagulant.

La poche de recueil rassemble donc tous les éléments du sang : globules rouges, plaquettes et plasma.

Pour le donneur, les pertes représentent :

(cid:216) 250 à 280 ml de plasma,
(cid:216) 15 à 20 g de protéines
(cid:216) 200 mg de fer
(cid:216) 1 à 2 g/l d’hémoglobine.

La compensation érythrocytaire se fait en 3 semaines (avec un pic réticulocytaire au 9ème jour). La
récupération volémique est de 40 à 80 ml/heure.

VI. LE DON DE PLASMA D’APHERESE

Ce don nécessite l’utilisation d’un séparateur. Au cours du prélèvement, le sang est séparé en ses différents
éléments. Le plasma est recueilli dans une poche, les autres éléments sont restitués au donneur. Le
prélèvement dure environ ¾ d’heure. Il est possible de faire 20 dons par an avec un intervalle d’au moins 2
semaines.

Pour le donneur, les pertes représentent :

(cid:216) 600 ml de plasma,
(cid:216) 25 à 40 ml de globules rouges
(cid:216) 45 g de protéines.

La récupération volémique est de 40 à 80 ml/heure.

VII. LE DON DE PLAQUETTES D’APHERESE

Ce don nécessite l’utilisation d’un séparateur. Au cours du prélèvement, le sang est séparé en ses différents
éléments. Les plaquettes sont recueillies dans une poche, les autres éléments sont restitués au donneur. Le
prélèvement dure environ 1 heure. Il est possible de faire jusqu’à 5 dons par an avec un intervalle d’au moins
8 semaines.

(cid:216) Contient de 2 à 8 x10 11 plaquettes dans 200 à 650 cc de plasma

Pour le donneur, les pertes représentent :

(cid:216) 40 à 50 ml de globules rouges
(cid:216) 20 à 40 % des plaquettes
(cid:216) moins de 45 g de protéines
(cid:216) 10 à 12 % du taux initial de calcium.

VIII. LE DON DE GLOBULES BLANCS D’APHERESE

Ce don nécessite un séparateur. Les globules blancs sont recueillis dans une poche, les autres éléments sont
restitués au donneur. Ce don est très limité car extrêmement contraignant. Il dure environ 2h30.

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IX. LE DON AUTOLOGUE

Il s’agit de prélever du sang à un donneur afin de transfuser à ce même donneur son propre sang. Ce don ne
peut se pratiquer, généralement, que pour une intervention chirurgicale prévue à une date précise. Il faut
alors déterminer la quantité de sang nécessaire. Ce prélèvemen t doit être débuté dans un délai qui tient
compte de la durée de conservation des globules rouges.

X. LESPRODUITS SANGUINS LABILES :

A- LES CGR
1 – Issu d’un seul donneur : soit sang total ou par érythrocytaphérèse

2 – Volume :
. ‡ 140 cc de GR (Unité Adulte)
. < 140 cc de GR (Unité Enfant) . + 80 à 100 cc SAGM 3 - Caractéristiques : ‡ 40 g Hb (UA) et Ht 50 - 70 % Leucocytes résiduels < 1,0 x 106 B- CONCENTRE DE PLAQUETTES ISSUES D'APHERESE (CPA) Prélevé sur 1 seul donneur par cytaphérèse Contient de 2 à 8 x10 ¹¹ plaquettes dans 200 à 650 cc de plasma Intérêt : mono donneur C- MELANGE DE CONCENTRES DE PLAQUETTE STANDARD (M-CPS) Obtenus par centrifugation d’une unité de sang totale = CPS Contenu en plaquettes d’un CPS : = 0,5.10¹¹ dans 40 à 60 ml de plasma Conservation entre 20 et 24°C en agitation continue La durée de conservation est au maximum 5 jours Posologie = 0.5 à 1 unité par 10 Kg de poids. D- LE PLASMA FRAIS CONGELÉ Diminution du risque viral Diminution des immunisations HLA Diminution des allo-immunisations ? 1- PFC sécurisé issu d'aphérèse . Sécurisation 120 jours . Mono donneur . 200, 400 ou 600 ml déleucocyté (PVA-SD) 2- Préparation et présentation du plasma frais congelé viro-atténué par solvant détergent Le PVA-SD est préparé en France à partir d’un pool de plasma de 100 donneurs maximum. Il s’agit de pools de plasma d’aphérèse de même groupe sanguin congelé dans les 6 heures suivant le prélèvement. L’inactivation des agents pathogènes est réalisée après congélation-décongélation (qui détruit les cellules) en utilisant un solvant (tri n-butyl phosphate : TnBP) et un détergent (Triton X100). L’élimination des inactivateurs s’opère par l’huile de ricin et chromatographie. Après filtration stérilisante, le plasma, produit acellulaire et stérile, est réparti aseptiquement en unités de 200cc Virus 5 fi fi fi 3- Présentation du plasma frais congelé viro-atténué par bleu de méthylène (PVA-BM) Le plasma frais congelé déleucocyté viro-atténué par bleu de méthylène (PVA-BM) est préparé à partir d’un plasma unitaire issu d’aphérèse puis traité à l’aide d’une méthode autorisée par l’AFSSaPS. Le plasma, préalablement déleucocyté pour éliminer les cellules résiduelles, est mis en contact avec le bleu de méthylène puis soumis à une illumination en lumière visible. Le BM résiduel est ensuite éliminé par une filtration spécifique. Le PVA-BM est congelé dans les 12 heures qui suivent la fin du prélèvement. Principe du traitement pour viro-atténuation par le bleu deméthylène (BM) Le BM présente une affinité pour les acides nucléiques. Après absorption de l’énergie lumineuse, il existe une production de formes actives d’oxygène qui dénaturent les acides nucléiques bloquant la réplication des virus. Le traitement d’atténuation virale par BM permet d’inactiver les virus enveloppés et certains virus non enveloppés selon les résultats présentés ci-dessous. 4- PLASMA FRAIS CONGELE DELEUCOCYTE VIRO -ATTENUE PAR AMOTOSALEN Caractéristiques: Volume: 200 à 300 ml Préparation: unitaire, sur un don d’aphérèse Congélation à –30°C ou < le plus rapidement possible et dans les 18 heures. Après décongélation: Amotosalen résiduel < ou = 2µM Validité: 1 an E- LES PSL D'AUTOTRANSFUSION - CGR - PFC . Non déleucocyté en général . Volume variable . Contenu en Hb variable . Conservation identique au CGR homologue . Érythrocytaphérèse . Durée de conservation après décongélation : 72 h . Conservation : idem CGR auto (42 jours) XI. LES MODALITES DE CONSERVATION DES PSL A. MODALITES DE CONSERVATION DES CGR (cid:216) 42 jours entre + 2° C et + 6°C (armoire réfrigérée sécurisée), (cid:216) congelé : 10 ans à –60° C, 4 ans à –30° C, (cid:216) déplasmatisé : 6 heures ou 24 heures, (cid:216) décongelé : 24 heures, (cid:216) B. MODALITES DE CONSERVATION DES PLASMAS FRAIS CONGELES (PFC) (cid:216) 1 an à – 30° C, (cid:216) décongélation dans un bain marie 20-30 minutes à 37° C, (cid:216) décongelé 6 heures entre + 2° C et + 6° C pour les homologues (72 heures pour les autologues). irradié après 15 jours : 24 heures. C. MODALITES DE CONSERVATION DES PLAQUETTES (cid:216) Plaquettes : 5 jours à 22° C sous agitation permanente, 6 CHAPITRE 2 : IMMUNO-HEMATOLOGIE Le sang a toujours fasciné les humains. La perte de sang accompagnant souvent la perte de vie, on a de tous temps tenté de restituer sinon la vie, du moins la vigueur avec du sang. Des progrès décisifs ont été obtenus en 1628 avec la découverte par Harvey de la circulation sanguine et, plus tard, de la voie intraveineuse. Dès lors, de multiples essais de transfusions ont été tentés : (cid:216) avec du sang d’animaux, amenant les catastrophes qu’on imagine (cid:216) et avec du sang humain, avec des succès inégaux. I. LE SYSTEME ABO En 1900, Landsteiner observe que le plasma de différents sujets agglutine les hématies de nombreux autres sujets et, poursuivant ses études, il en déduisit l’existence des groupes A, B, et O. Un an plus tard, De Castillo décrit un quatrième groupe : AB. Curieusement, l’importance de ces groupes sanguins pour les transfusions n’a été perçue que dix ans plus tard car ce n’est qu’en 1910 que les règles de la transfusion sanguine ont été édictées par Schultz et Ottenberg. En 1924, Bernstein démontre la transmission héréditaire selon les lois de Mendel des facteurs de groupes sanguins. A. DEFINITIONS SYSTEME ABO : Ensemble d’antigènes génétiquement déterminés, présents à la surface de la membrane des cellules sanguines, regroupés en systèmes génétiquement codés et indépendants les uns des autres. Le groupe sanguin ABO est défini par la présence ou par l’absence d’antigènes à la surface des hématies et d’anticorps dans le plasma. ANTIGENES : Substance capable de provoquer une réaction immunitaire, puis de réagir spécifiquement avec le produit de cette réaction (anticorps). ANTICORPS : Protéines (immunoglobulines) dont la production est provoquée par l’administration d’un antigène et capable de se lier spécifiquement à lui. PHENOTYPE : Ensemble des caractères apparents d’un individu. GENOTYPE : Ensemble du matériel génétique porté par un individu, y compris les gènes non exprimés. B. LES ANTIGENES ABO l’antigène A l’antigène B. Il existe deux antigènes ABO, présents à la surface des globules rouges et de la plupart des tissus de l’organisme : (cid:216) (cid:216) 7 Il convient de noter : (cid:216) avec la présence de l’antigène A seul : (cid:216) avec la présence de l’antigène B seul : (cid:216) avec la présence des 2 antigènes A et B : (cid:216) avec l’absence des 2 antigènes A et B : C. Il existe deux sortes d’anticorps ABO : (cid:216) (cid:216) les anticorps anti-A les anticorps anti -B. LES ANTICORPS ABO GROUPE A GROUPE B GROUPE AB GROUPE O Ils sont : (cid:216) naturels (cid:216) réguliers (cid:216) IgM. On détermine leur présence dans le plasma quand l’antigène correspondant est absent de l’hématie et leur absence dans le plasma lorsque l’antigène correspondant se trouve à la surface de l’hématie. En ce qui concerne les groupes sanguins : (cid:216) avec la présence de l’anticorps Anti-B seul : (cid:216) avec la présence de l’anticorps Anti-A seul : (cid:216) avec la présence des 2 anticorps Anti-A et Anti-B : (cid:216) avec l’absence des 2 anticorps Anti-A et Anti-B : GROUPE AB. GROUPE A GROUPE B GROUPE O REPARTITION DES GROUPES SANGUINS GROUPE SANGUIN A B AB O ANTIGENE A B A et B Ni A ni B ANTICORPS Anti-B Anti-A Aucun Anti-A et Anti-B FREQUENCE 45 % 9 % 3 % 43 % D. LA CARTE DE GROUPE SANGUIN 1 prélèvement = Carte provisoire 2 prélèvements à distance l’un de l’autre = Carte définitive E. LA REGLE DE COMPATIBILITE TRANSFUSIONNELLE DE CONCENTRE GLOBULAIRE Il est impératif de tenir compte des anticorps naturels Anti-A et Anti-B présents dans le plasma du patient. Si possible, le groupe sanguin des hématies à transfuser doit être identique au groupe sanguin du patient. En dehors des transfusions isogroupes : (cid:216) (cid:216) (cid:216) Tout autre type de transfusion est incompatible et entraînera un accident transfusionnel hémolytique. la transfusion d’hématies O à un receveur A, B, AB est compatible la transfusion d’hématies A à un receveur AB est compatible la transfusion d’hématies B à un receveur AB est compatible. 8